Сергею насчет размножения орхидей


Сергей, не могли бы вы опубликовать опыт любителя с Камчатки по размножению орхидей семенами.



Ответ Ивану. - Ракицкий Сергей - 23:00 06 10 2002

Опубликую, возможно, даже завтра. Это не Вы некорректно задали вопрос. Это на Вас некоректно наехали. Приношу Вам свои извинения.



Ответ на: Сергею насчет размножения орхидей - Сергей - 0:23 08 10 2002

******************** Посылаю нашу переписку как есть. Жаль, что У Карена много работы и он не может оформить это в виде нормальной статьи. ******************* >Один из моих знакомых хочет попробовать размножение меристемой. Не мог >бы ты посоветовать ему, как в домашних условиях можно стерилизовать все, >что нужно для этого процесса. Или ты пользуешься нормальной лабораторией >и ламинаром? Да нет, какой там ламинар, все делается дома на кухне и все очень просто. Ниже вся информация по этому поводу. Размножение меристемой меня тоже очень сильно интересует, не можешь дать email твоего знакомого? На предмет обмена опытом. Я пытался этим заниматься когда-то давно, есть некоторая литература, но в моем случае все уперлось в реактивы, там же разные гормоны используются, они вам доступны? Теперь про стерилизацию. Давай я для начала просто скопирую письмо, которое я уже писал по этому поводу знакомому в Новосибирск: --------------------------------------------- Я посадил в такую среду (мг/л): Ca(NO3)2*4H2O -1000 KH2PO4 - 250 MgS04*7H20-250 FeSO4*7H2O-25 Трилон Б- 37.3 (NH4)2SO4- 500 MnSO4*4H2O-7.5 Гумат натрия-50 Пептон- 2000 Сахар- 20000 активированный уголь - 1000мг Отдельно разводят агар-агар - примерно 10 гр. Его надо залить небольшим количеством воды, оставить для набухания на пару часов, потом разогреть до растворения и влить в готовую среду. pH не проверял. [потом оказалось, что pH это важно, надо проверять, должно быть 5, но обычно так и бывает]. Затем стерилизуем. Я делал так: сделал пол литра среды в литровой колбе, заткнул ее ватно-марлевой пробкой, которую предварительно прожарил в духовке (пробка завернута в фольгу, жарим до светло-коричневого цвета) и прогревал эту колбу со средой на водяной бане по пол часа в день, кажется раза 4 или пять. То есть кипятим пол часа, потом оставляем на сутки в теплом месте. На следующий день тоже самое и так раза 4-5. К этому времени все микробы сдохнут. Естественно ватно-марлевая пробка должна быть достаточно плотной и вытаскивать ее нельзя. Потом подготовил несколько колб поменьше, тоже заткнул прожаренными пробками и прокалил их в духовке. И, когда они остыли, залил в них уже стерильную среду и еще раз прокипятил на водяной бане. Здесь надо делать все быстро и над печкой или над кипящей водой, чтобы, когда ты открываешь пробки, туда не попали споры микробов. Я работал над электроплиткой. Лучше работать в четыре руки, чтоб быстрее было, мне жена помогала. Еще. По технологии пробки перед тем как заткнуть ими колбу проносят над пламенем газовой горелки. У меня горелки нет, поэтому я после того как пробка вставлена в колбу, прогревал ее горлышко (довольно сильно) над плиткой. (То же самое делал и после посева семян.) Теперь про стерилизацию семян. В книжке написано, что стерилизуют хлоркой. Я насыпал несколько грамм хлорки в 100мл воды, все это настаивалось пару часов, потом отфильтровал и фильтрат использовал для стерилизации. Методика такая - наливаем фильтрат в пробирку, несколько мл., насыпаем туда семена и встряхиваем три-пять минут. В книгах не написано, надо ли промывать после хлорки, поэтому в одну колбу я просто перенес пипеткой эту хлорную воду с семенами. А остальные семена перенес пипеткой в другую пробирку со стерильной водой, они там сразу осели на дно и уже оттуда пипеткой разнес по колбам. Пипетка естественно должна быть тоже стерильной, можно в спирт макать. Вот и вся технология. Все это теперь у меня стоит на шкафу под двумя люминисцентками и температура там гуляет от 28 градусов днем до 20 ночью (это конечно плохо...). Чтобы среда не сильно сохла, надо горлышки колб закрыть полиэтиленовой пленкой поверх ватно-марлевых пробок. И последнее. На самом деле возни на один день. И все. Когда сажаешь обычные растения семенами, то возни гораздо больше, поливать, не пересушить и т.п. А здесь засеял колбы и свободен надолго. -------------------------------------------------------------- Теперь еще комментарий. Во первых я перетравил семена в хлорке, надо было использовать меньшую концентрацию. Мой друг стерилизовал 3-мя разными способами - перекисью водорода, хлораксом и гипохлоритом натрия. Он написал мне: "Решили испытать все три, т.к. мы нашли перекись и гипохлорит, но неизвестной концентрации, так что разводили на глаз. Сейчас только поглядел в бинокуляр на семена, те, что были в хлораксе сильно набухли, остальные - что-то пока спят... Может мы их передержали, может концентрация была высокой, может еще проснутся.". Но потом оказалось, что проросли только те, которые обработаны гипохлоритом, он считает, что дело не в веществе, а просто в случае с гипохлоритом они угадали концентрацию. Во вторых оказалось, что ватно марлевые пробки большого диаметра очень ненадежны. Вероятно они не прожариваются насквозь, в глубине остаются живые споры. Пробка рано или поздно отсыревает, споры прорастают, все это падает в результате на агар и на среде появляются кружочки плесени. У меня было три широкогорлые колбы, и все три колбы заплесневели через два-три месяца. С узкогорлыми колбами такого не происходит. Когда плесень только появляется на среде, то растущие протокормы еще можно спасти. Я над плиткой вытащил пробку из колбы где были проросшие семена и уже появилась плесень, вырезал обычным кухонным ножом кусочек агара с проростками из этой колбы, стараясь не задевать кружочки плесени и перенес его в другой сосуд. Нож предварительно макнул в 96% спирт. И все растет прекрасно. Все стерильно. Теперь я полностью перешел с колб на обычные банки с железными завинчивающимися крышками из под компотов и майонеза и т.п. Мне кажется они надежнее колб (правда твердой уверенности нет - я только недавно перешел на банки) и возни с ними меньше. Банку моем, сушим, наливаем туда немного 96 спирта, закрываем, встряхиваем, затем сливаем спирт и сушим над плиткой. Плитка должна быть достаточно горячей, банку держу в одной руке горлом вниз, к плитке, крышку в другой, тоже над плиткой, когда спирт высохнет завинчиваем крышку. Если крышка герметична (а у новых банок они герметичны), то она присасывается к банке. Остывшую банку можно открывать только над плиткой, так как она засосет воздух и этот воздух должен быть стерильным. Над плиткой открываем банку и наливаем в нее на 1см простерилизованную, как написано выше, среду. Я еще на всякий случай проваривал эту банку со средой на водяной бане пол часа, крышка при этом закрыта неплотно, чтоб не взорвалась. Еще одна тонкость - горячую банку с расплавленной средой лучше завернуть в полотенце, чтобы остывала медленно. Иначе стенки остывают быстрее чем среда и на них накапливается конденсат. Хотя это не проблема, конденсат можно слить перед посевом. Пересаживать проростки на свежую среду тоже просто. Сделал из толстой проволоки что-то типа лопаточки, макаю ее в спирт, затем просушиваю над плиткой, открываю банку с проростками (все над плиткой), тыкаю этой лопаточкой в агар чтоб остыла, подцепляю очередной проросток и быстро переношу в банку с новой средой. Проблем со стерильностью пока небыло. Ну что еще. По моему, все разговоры о том, что качество агара падает при частом его растапливании - застывании -- полная ерунда. Карамелизация сахара тоже не проблема, это касается только тех, кто использует скороварки или автоклав. Всего хорошего. Сообщайте о результатах, очень интересно узнать ваши подробности и чем у вас эта затея кончится. Карен Санамян

X